鐘醫當然不會讓這種氣徹底的下去。
他開口說話。
“我當然知道大家的震驚,也知道大家的擔心和憂慮。所以……我們那實驗來說話吧。”鐘醫說道。
“實驗過程。”楊迫不及待地說道。
鐘醫當然不會讓楊久等。
“地藍消炎口服是由公英、板藍、苦地丁、黃芩組,有清熱解毒、消腫利咽的功效,適用于癤腫、腮腺炎、咽炎、扁桃炎。
我們在臨床上常用于治療急上呼吸道染,效果良好。
當然,大家都沒有什麼實際例子。
現在,我們有顯示地藍消炎口服對脂多糖導的大鼠急肺炎有保護作用,可減輕大鼠急肺炎模型中肺組織的炎癥反應,對肺組織的病理損傷有修復作用。
我們研究發現,肺部染疾病發的炎癥,與三羧酸循環等能量代謝過程相關。
代謝組學是對生代謝進行定量分析,并尋找代謝與生理病理變化相對關系的研究方式。
靶向代謝組學通過對生樣品中目標的低度代謝產進行定量,能夠更準確地反映生系統中代謝分子的濃度變化,是代謝組學當前研究的新熱點。
地藍消炎口服在臨床廣泛運用于呼吸系統疾病的防治,療效顯著,基礎研究結果顯示,地藍消炎口服能夠顯著改善脂多糖導小鼠急肺炎,但尚未有對能量代謝方面的研究。
所以,我們做了整個研究,本研究以脂多糖導ICR小鼠急肺炎模型為研究對象,以靶向代謝組學為技手段。
用這個研究來探討地藍消炎口服對脂多糖導的急肺炎小鼠糖酵解和三羧酸循環等機能量代謝的影響及其可能的作用機制。
為后續開展地藍消炎口服抗急肺炎的作用機制研究與臨床用藥提供方向和依據。”
見眾人豎起耳朵在聽,鐘醫就沒有賣關子了。
他說道:“首先,我們用到的儀有:小時YQ-3110微量振渦旋混勻,低速臺式離心機TDL-80-2B。
電熱恒溫水浴鍋,超純水系統,型分析天平(d=0.01毫克),Kh-500B型超聲清洗,來自昆山市超聲儀有限公司。
TSQ8000型三重四級桿氣相譜質譜聯用儀,譜柱多功能酶標儀。
所用的藥有,我們自己生產的地藍消炎口服,。
拜阿司匹林。乙醚。甲醇。1,2-13C2-豆蔻酸、吡啶、N,O-雙(三甲基硅基)三氟乙酰胺(BSTFA)、甲氧基胺鹽酸鹽。正己烷。
氯化鈉。標準品:丙酮酸、酸、葡萄糖、3-磷酸甘油酸、琥珀酸蘋果酸、富馬酸、檸檬酸和α-酮戊二酸。”
“方法那就更加簡單了。”
“首先,實驗及樣本收集36只ICR小鼠,質量(20±5)g,雌雄各半,按質量隨機分為6組,每組6只。
也就是對照組、模型組、拜阿司匹林組(200毫克千克)、地藍消炎口服低劑量組(1.3毫升千克)、地藍消炎口服中劑量組(3.9毫升千克)、地藍消炎口服高劑量組(11.7毫升千克)。
拜阿司匹林組和地藍消炎口服各劑量組給予相應劑量藥,每日1次,連續5d,空白組和模型組灌胃等積的生理鹽水。
末次給藥1小時后,除空白組外,其余各組構建急肺炎模型。
即使用異氟烷麻醉小鼠后,用脂多糖(2毫克千克)給小鼠滴鼻造模,空白組滴相同積生理鹽水,造模12小時后進行取材。
各組小鼠摘眼球取,解剖并取左肺中葉用百分之10甲醛溶固定,石蠟包埋后進行小時E染,分裝部分清用于檢測IL-10、TNF-α和NF-κB的含量,剩余清置于-80攝氏度保存,進行后續代謝組學檢測。”
鐘醫了一口氣,繼續說道。
“其次,是溶的配制。
稱取丙酮酸、酸、琥珀酸、富馬酸、蘋果酸、α-酮戊二酸、磷酸烯醇式丙酮酸、順式烏頭酸、3-磷酸甘油酸、檸檬酸、異檸檬酸和葡萄糖對照品,溶解1毫克毫升的對照品儲備。
量取上述對照品儲備分別稀釋4、120、16、0.1、0.5、1、0.02、0.01、0.04、2.5、0.16、240微克毫升的對照品溶,4攝氏度保存。
稱取1,豆蔻酸適量置于10毫升容量瓶中,加甲醇稀釋溶解,配制1毫克毫升的標儲備,4攝氏度保存。
吸取標儲備適量,加甲醇稀釋濃度為5微克毫升的標工作。
然后是樣本前理及衍生化反應。
取50微升清,加200微升預冷的含1,2-13C2-豆蔻酸(5微克毫升)的甲醇溶,渦旋3分鐘,4攝氏度離心10分鐘(14000r分鐘)。
同時,取上清100微升置30攝氏度真空濃儀揮干2小時,加10毫克毫升甲氧胺吡啶30微升,渦旋5分鐘,30攝氏度振1.5小時。
繼續加30微升BSTFA,渦旋5分鐘,37攝氏度振半小時,最后將樣品4攝氏度離心10分鐘,14000r分鐘,取上清進樣。
最后,分析條件譜條件:載氣為氦氣,流速1.2毫升分鐘,采用分流進樣,分流流速為24.0毫升分鐘,分流比為20∶1。
譜柱:TG-5MS30m×0.25mm×0.25μm,進樣口溫度300攝氏度。
升溫程序:60攝氏度保持1分鐘,以20攝氏度分鐘升至320攝氏度,保持5分鐘。
質譜條件:EI電離源,電子能量為70eV,離子源溫度為300攝氏度,傳輸線溫度為300攝氏度。溶劑峰延遲時間為3.8分鐘。
采用全掃描模式,掃描范圍mz50~500。
各代謝靶向定量測定采用選擇反應監測(SRM)模式,撞氣為高純氬氣(99.999%)。
質譜參數優化吸取一定量的各代謝的儲備和標儲備進行混合,用甲醇稀釋并揮干,采用衍生化條件進行衍生化并進樣,采用全掃模式,對代謝進行測定,確定各代謝及標的出峰時間。
然后,我們再采用TSQ8000的AutoSRM分析模式自優化質譜儀分析參數,優化后的各質參數是……”
“是什麼?”楊好奇又迫切地問道。
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